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matrigel新上映_matrigel基质胶是什么(2024年12月抢先看)

内容来源：爱魅影影视资源所属栏目：导读更新日期：2024-11-30

matrigel

𐟧즎⧴⨡€管生成的奥秘𐟒‰ 𐟔 你知道“血管生成”是什么吗？血管生成，也被称为血管新生，是生物体内新血管从已存在的血管中生长出来的过程。这个过程在组织修复、生长以及某些疾病如癌症中起着关键作用。𐟒ኊ𐟔젥悤𝕧 ”究“血管生成”？ 1️⃣ 免疫组织化学染色实验：通过检测组织切片中的特定血管标志物，如VEGF和CD31，来识别新生血管。 2️⃣ 免疫荧光染色实验：利用荧光标记抗体，在显微镜下直观地观察细胞和组织的血管结构。 3️⃣ 体外管状结构形成实验：通过在Matrigel上培养内皮细胞，评估其在体外形成类似血管结构的能力。 𐟒ᠨဧ”Ÿ成的研究不仅有助于理解生物体的生长和修复机制，还为医学研究和治疗提供了新的视角。通过这些实验方法，我们可以更深入地探索血管生成的奥秘，为医学进步贡献力量！𐟌Ÿ

详细步骤protocol 1. 𐟓栤𜠤𛣥‰至少1小时，用Vitronectin XF™或Corning⮠Matrigel⮥Œ…被新的培养板。 𐟧Š 将mTeSR™ Plus恢复至室温（15-25Ⰳ），并进行等分。注意：不要在37Ⰳ水浴中加热mTeSR™ Plus。 𐟚🠧”豠mL的D-PBS清洗细胞。 𐟌€ 添加1 mL ReLeSR™并在1分钟内吸出，使集落暴露在余留的液体中。 𐟕’ 37Ⰳ孵育6-8分钟。最佳解离时间可能因所使用的细胞系而异。 𐟌𑠦𗻥Š 1 mL mTeSR™ Plus培养基。 𐟌€ 将培养板放在涡旋振荡器上，在室温下以1200 rpm涡旋2-3分钟。或一只手握住培养板，另一只手用力敲击板的侧面约30-60秒。 𐟧𔠤𝿧”赠mL血清移液管将分离的细胞聚集体转移到15 mL离心管中。 𐟌𑠥𐆧𛆨ƒž聚集体混合物以适当密度接种到含有mTeSR™ Plus培养基包被的培养板上。 𐟌᯸ 将培养板置于37Ⰳ培养箱中。多次快速地前后左右移动培养板，使细胞聚集体均匀分布。24小时内勿动培养板。聚集体分布不均匀可能会导致人ESC和iPSC的分化。 𐟔„ 根据需要进行更换培养基或进行传代。培养基可以每天或每隔一天更换一次。如间隔两天换液，请添加两倍体积的培养基。

Transwell实验详解，测侵袭！体外Transwells小室趋化侵袭实验——24孔趋化小室(孔径8um) 𐟔 实验原理在Transwell实验中，上室种植肿瘤细胞，下室加入FBS或特定趋化因子。肿瘤细胞会向营养成分高的下室移动。与肿瘤细胞迁移实验不同，此实验在上室侧铺上一层基质胶，模拟体内细胞外基质。细胞欲进入下室，需先分泌基质金属蛋白酶（MMPs）降解基质胶，才能通过聚碳酸酯膜。计数进入下室的细胞量可反映肿瘤细胞的侵袭能力。 𐟓 实验方法大致流程 1️⃣ 将冻存的Matrigel胶在4℃冰箱中过夜解冻，使其液态化。 2️⃣ 用不含10%胎牛血清的RMPI1640培养液稀释Matrigel胶，按1:1的比例在冰水浴中混匀。 3️⃣ 将稀释后的Matrigel胶均匀铺在聚碳酸酯膜上，覆盖整个膜面，置入37℃恒温箱中静置30min-1h使其凝固形成基质屏障胶。 4️⃣ 将转染后收集的细胞或对照组细胞进行常规胰酶消化、PBS冲洗3遍。 5️⃣ 用不含10%胎牛血清的完全培养液重悬细胞，进行细胞计数并调整细胞密度至2.5㗱0^5个/mL。 6️⃣ 将形成基质屏障胶的膜用不含10%胎牛血清的RMPI1640培养液进行浸润水化。于上室加入处理后的细胞，24孔板小室一般加200⵬。 7️⃣ 在下室内加入含有20%优质胎牛血清的RMPI1640培养液进行细胞侵袭诱导，每个组设3个平行复孔。 8️⃣ 将小室在37℃、5%的CO2恒温培养箱中培养24h后，倒弃上室中的细胞及液体，并用PBS冲洗2遍。 9️⃣ 将上室内的Matrigel基质屏障胶用棉签擦去，滤膜上层贴壁生长但未能穿过膜的细胞。将上室置于95%乙醇室温固定30min。 𐟔Ÿ 将固定后的膜经结晶紫染色10~15min后，蒸馏水冲洗终止染色。 1️⃣1️⃣ 显微镜下随机挑选5个低倍视野(200X)的细胞计数，以其穿膜细胞的平均数作为细胞侵袭能力的参数，计算平均值。通过以上步骤，你可以评估肿瘤细胞的侵袭能力，进一步了解肿瘤细胞的生物学特性。

裸鼠成瘤常见问题解答，避免实验失败！在进行裸鼠成瘤实验时，可能会遇到一些问题，以下是一些常见的解答： 𐟔 瘤子长不出来怎么办？可能是细胞状态不佳，活力不足，或者肿瘤细胞不易成瘤。可以尝试加入Matrigel辅助，增大接种量，或者更换细胞系。另外，如果小鼠周龄太大或者免疫排斥，建议使用免疫缺陷程度更大的小鼠（如Nod-scid小鼠或aNOG小鼠）。 𐟓‰ 肿瘤体积差异大是怎么回事？如果发现小鼠的肿瘤体积差异很大，可能是因为小鼠周龄不一致或者接种细胞量不同。建议重新进行实验分组。 𐟔„ 小鼠瘤子长起来又消失？肿瘤块先缩小后变大是很常见的现象，很可能是炎症反应。肿瘤细胞被小鼠自身吸收，继续观察几周后如果肿瘤细胞无法重新长出，建议更换小鼠。你们在实验过程中还遇到哪些问题呢？欢迎补充～

Transwell实验，一文搞定！实验步骤： 𐟧Š 基质胶的准备：将保存在-20Ⰳ的基质胶转移到4Ⰳ冰箱中，让其过夜融化。使用前，用无血清培养基按1:2的比例稀释。 𐟧𜠥𐏥š„预处理：将24孔板和Transwell小室用1xPBS浸泡5分钟，以湿润小室。若进行侵袭实验，还需在小室中铺80 Matrigel胶，并在37Ⰳ培养箱中放置30分钟使其凝固。 𐟧젧𛆨ƒž的准备：用胰蛋白酶消化细胞，并用无血清培养液洗涤。然后，用含有1%FBS的培养基重悬细胞，计数并稀释至2x105细胞/mL（侵袭实验中为4x105细胞/mL）。将0.3mL细胞悬液接种到每个小室内，下层的24孔板中加入0.7mL含10%FBS的完全培养液，每组设3个复孔，置于37Ⰳ培养箱中培养24小时（侵袭实验中为48小时）。 𐟔„ 固定与染色：培养结束后，每孔加入1mL 4%多聚甲醛溶液，室温固定10分钟。然后，吸去固定液，用1xPBS洗涤一次，每孔加入1mL 0.5%结晶紫溶液，染色30分钟后用1xPBS洗三次，晾干。 𐟔 观察与计数：用棉签小心擦去Transwell小室内没有迁移的细胞，置于200x显微镜下观察，计数每个视野中的细胞数。 𐟓Š 统计分析：对实验数据进行统计分析。注意事项： 𐟚렩🥅气泡：将小室放入培养板时，要注意不要有气泡产生，因为气泡会减弱下层培养液的趋化作用。 𐟧𝠦“橙䦜꨿移细胞：用棉签小心擦去Transwell小室内没有迁移的细胞时，不能碰到已经穿膜的细胞。 𐟕𐯸 饥饿处理：对于难穿膜的细胞，可以用无血清培养基饥饿处理12-24小时。

细胞迁移与侵袭实验全攻略细胞迁移与侵袭实验是一种研究细胞行为的强大工具。通过将Transwel小室放入培养板中，可以模拟细胞在不同环境下的迁移和侵袭行为。以下是详细的实验步骤和注意事项： 𐟧ꠦ料准备显微镜：可拍照显微镜 Transwel小室：孔径8um，未包被胶的（Coste和Corning公司的也常用） 24孔板：与购买的Transwel小室相配套培养基：DMEM（含1%胎牛血清）和1640培养基完全培养基：DMEM和1640完全培养基（可加至20%血清）无菌PBS、棉签、胰酶、甲醇、结晶紫染液（0.1% (g/ml) PBS结晶紫） 𐟔砥ꌦ�ꤊ基质胶铺板使用BD公司的Matrigel，按1:8的比例稀释，包被Transwel小室底部膜的上室面，置于37℃30分钟使Matrigel聚合成凝胶。使用前进行基底膜水化。制备细胞悬液让细胞撤血清饥饿12-24小时，进一步去除血清的影响（这一步不是必须的）。消化细胞，终止消化后离心弃去培养液，用PBS洗1-2遍，用含BSA的无血清培养基重悬，调整细胞密度至5x105/ml。接种细胞取100细胞悬液加入Transwel小室。 24孔板下室一般加入600含20%血清的培养基。特别注意下层培养液和小室间常会有气泡产生，一旦产生气泡，下层培养液的趋化作用就减弱甚至消失了。在种板时要特别留心，一旦出现气泡，要将小室提起，去除气泡，再将小室放进培养板。培养细胞常规培养12-48小时（主要依细胞侵袭能力而定），24小时较常见。时间点的选择除了要考虑到细胞的侵袭力外，处理因素对细胞数目的影响也不可忽视。结果统计直接计数法：贴壁细胞计数，所谓的“贴”是指细胞穿过膜后，可以附着在膜的下室侧而不会掉到下室里面去。通过给细胞染色可在镜下计数细胞。取出Transwel小室，弃去孔中培养液，用无钙的PBS洗2遍，用甲醇固定30分钟，将小室适当风干。0.1%结晶紫染色20分钟，用棉签轻轻去掉上层未迁移细胞，用PBS洗3遍。400倍显微镜下随机五人视野观察细胞，记数。通过以上步骤，你可以观察到细胞的迁移和侵袭行为，并对其进行定量分析。

细胞迁移与侵袭实验全攻略 𐟔젥ꌧ›„ 通过 Transwell 小室实验，研究细胞的迁移与侵袭能力，以及不同因素对细胞该行为的影响。 𐟓– 实验原理细胞迁移与侵袭实验将 Transwell 小室放入培养板中，小室内为上室，培养板内为下室，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔。聚碳酸酯膜具有通透性，下层培养液中的成分可影响上室内的细胞。通过使用不同孔径和处理的聚碳酸酯膜，可进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等研究。 𐟧ꠥꌦ料可拍照显微镜 Transwell 小室（孔径 8） 24 孔板 BD 公司的 Matrigel 无血清 DMEM 含 1% 胎牛血清的 DMEM 和 1640 培养基 DMEM 完全培养基 1640 完全培养基（也可加到 20% 血清）无菌 PBS，棉签，胰酶，4% 多聚甲醛固定液或甲醇结晶紫染液（0.1% (g/ml) PBS 结晶紫） 𐟓 实验步骤基质胶铺板：用 BD 公司的 Matrigel 按 1:8 稀释，包被 Transwell 小室底部膜的上室面，置 37℃ 30min 使 Matrigel 聚合成凝胶。使用前进行基底膜水化。制备细胞悬液：让细胞撤血清饥饿 12 - 24h，去除血清影响（非必须步骤）。消化细胞，终止消化后离心弃去培养液，用 PBS 洗 1 - 2 遍，用含 BSA 的无血清培养基重悬，调整细胞密度至 5㗱0⁵/ml。接种细胞：取细胞悬液 100 加入 Transwell 小室。在 24 孔板下室加入 600 含 20% 血清的培养基，注意避免产生气泡。常规培养 12 - 48h（依癌细胞侵袭能力而定，24h 较常见）。结果统计：取出 Transwell 小室，弃去孔中培养液，用无钙的 PBS 洗 2 遍，甲醇固定 30 分钟，将小室适当风干。用 0.1% 结晶紫染色 20 min，用棉签轻轻擦掉上层未迁移细胞，用 PBS 洗 3 遍。在 400 倍显微镜下随机五个视野观察细胞，记数。 𐟓Š 实验结果记录显微镜下观察到的细胞迁移与侵袭的数量及分布情况。 𐟒젥ꌨ分析实验结果，探讨细胞迁移与侵袭能力的变化原因，以及实验过程中可能存在的误差和影响因素。

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